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https://hdl.handle.net/20.500.14094/90004745
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2024-04-25
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90004745 (fulltext)
pdf
220 KB
7
メタデータ
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メタデータID
90004745
アクセス権
open access
出版タイプ
Accepted Manuscript
タイトル
Efficient production of antibody Fab fragment by transient gene expression in insect cells
著者
Mori, Keita ; Hamada, Hirotsugu ; Ogawa, Takafumi ; Ohmuro-Matsuyama, Yuki ; Katsuda, Tomohisa ; Yamaji, Hideki
著者名
Mori, Keita
著者名
Hamada, Hirotsugu
著者名
Ogawa, Takafumi
著者名
Ohmuro-Matsuyama, Yuki
著者ID
A1208
研究者ID
1000050335460
KUID
https://kuid-rm-web.ofc.kobe-u.ac.jp/search/detail?systemId=0746680e0db53e41520e17560c007669
著者名
Katsuda, Tomohisa
勝田, 知尚
カツダ, トモヒサ
所属機関名
工学研究科
著者ID
A0921
研究者ID
1000040283874
KUID
https://kuid-rm-web.ofc.kobe-u.ac.jp/search/detail?systemId=87d20630482bf7df520e17560c007669
著者名
Yamaji, Hideki
山地, 秀樹
ヤマジ, ヒデキ
所属機関名
工学研究科
収録物名
Journal of Bioscience and Bioengineering
巻(号)
124(2)
ページ
221-226
出版者
Elsevier
刊行日
2017-08
公開日
2018-09-01
抄録
Transient gene expression allows a rapid production of diverse recombinant proteins in early-stage preclinical and clinical developments of biologics. Insect cells have proven to be an excellent platform for the production of functional recombinant proteins. In the present study, the production of an antibody Fab fragment by transient gene expression in lepidopteran insect cells was investigated. The DNA fragments encoding heavy-chain (Hc; Fd fragment) and light-chain (Lc) genes of an Fab fragment were individually cloned into the plasmid vector plHAneo, which contained the Bombyx mori actin promoter downstream of the B. mori nucleopolyhedrovirus (BmNPV) IE-1 transactivator and the BmNPV HR3 enhancer for high-level expression. Trichoplusia ni BTI-TN-5B1-4 (High Five) cells were co-transfected with the resultant plasmid vectors using linear polyethyleneimine. When the transfection efficiency was evaluated, a plasmid vector encoding an enhanced green fluorescent protein (EGFP) gene was also co-transfected. Transfection and culture conditions were optimized based on both the flow cytometry of the EGFP expression in transfected cells and the yield of the secreted Fab fragments determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Under optimal conditions, a yield of approximately 120 mg/L of Fab fragments was achieved in 5 days in a shake-flask culture. Transient gene expression in insect cells may offer a promising approach to the high-throughput production of recombinant proteins.
キーワード
Insect cell
Transient gene expression
Recombinant protein production
Fab fragment
High Five celll
カテゴリ
工学研究科
学術雑誌論文
権利
© 2017, The Society for Biotechnology, Japan.
This manuscript version is made available under the CC-BY-NC-ND 4.0 license http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/
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資源タイプ
journal article
言語
English (英語)
ISSN
1389-1723
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eISSN
1347-4421
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DOI
https://doi.org/10.1016/j.jbiosc.2017.03.007
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