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https://hdl.handle.net/20.500.14094/00317239
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00317239 (fulltext)
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メタデータ
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メタデータID
00317239
アクセス権
open access
出版タイプ
Version of Record
タイトル
ヒトRANK ligand遺伝子の5'側上流領域の解析
その他のタイトル
Characterization of the 5'-flanking region of the human RANK ligand gene
著者
梶本, 和義 ; 北澤, 理子 ; 北澤, 荘平
著者名
梶本, 和義
Kajimoto, Kazuyoshi
カジモト, カズヨシ
著者名
北澤, 理子
Kitazawa, Riko
キタザワ, リコ
著者名
北澤, 荘平
Kitazawa, Sohei
キタザワ, ソウヘイ
収録物名
神戸大学医学部紀要
Medical journal of Kobe University
巻(号)
62(3/4)
ページ
143-150
出版者
神戸大学医学会
刊行日
2002-03
公開日
2006-08-21
注記
本文ファイルは、国立情報学研究所CiNiiより提供されたものです。
抄録
破骨細胞分化因子 (RANK ligand) は骨芽細胞に発現する膜貫通性蛋白で, 破骨細胞前駆細胞上の受容体RANKと結合し破骨細胞分化のシグナルを伝達す訓種々の骨吸収因子はRANKL発現調節を介して破骨細胞形成を冗進ずると考えられている。本研究では1a, 25(OH)_2D_3による破骨細胞形成の分子機序を解析するために, ヒトRANKL遺伝子5 '側上流領域をクローニングし, 1a, 25(OH)_2D_3によるRANKL転写調節機構について検討した。ヒトRANKL遺伝子の基本転写調節部位には逆TATA, CAATボックスがあり既報のマウスRANKLプロモーターとの類似性を認めた。ゲルシフトアッセイでは3箇所の vitamin D_3 結合配列 (VDRE) 類似配列のうち最上流 (-1584/-1570) のAGGTCAAAGACTACAがVDR, RXRaヘテロダイマーと in vitro での結合性を示した。核蛋白抽出物とステロイドホルモン受容体に対する抗体を用いたゲルシフトアッセイでもVDR, RXRaヘテロダイマーが同配列に結合することが示された。ヒト骨肉腫細胞株SaOS_2に対する一過性遺伝子導入実験では, 1a, 25(OH)_2D_3はVDREを含むRANKLプロモーターコンストラクトの転写活性を促進したが, VDREを欠失したコンスラクトやVDREに変異を導入したコンストラクトに有意な作用を示さなかった。以上より1a, 25(OH)_2D_3は骨芽細胞に作用して, 遺伝子5 '側上流に存在するVDREを介してRANKL遺伝子発現冗進を誘導することにより破骨細胞形成を促進することが示唆された。
RANK ligand has been identified as a prerequisite to osteoclastogenesis. Most of the bone resorptive factors are thought to modulate bone resorption by regulating RANKL expression on osteoblasts and stromal cells. To elucidate the mechanism regulating human RANKL gene expression, we first examined the effect of 1 α , 25 (OH)_2D_3 on the RANKL gene by nuclear run on analysis, and found that it accelerated the transcription rate of the RANKL gene in the SaOS2 cell line. We then focused on the promoter structure and cis-acting elements of the human RANKL gene that conducts 1α, 25 (OH)_2D_3 signaling. From the human genomic library, we cloned a 11kb frament containing the 5'-flanking region of the RANKL gene and accessed its promoter activity by transient transfection assay. The basic promoter of human RANKL gene comprises inverted TATA-and CCAAT-boxes and putative Runx2 binding sites. Three putative VDRE are located at -1584/-1570 (VDRE1), -1418/-1404 (VDRE2), and -1383/-1369 (VDRE3) from the transcription start site. Radio-labeled double stranded oligonucleotides corresponding to the three putative VDREs were generated, mixed with nuclear extract from 1α, 25 (OH)_2D_3-treated SaOS2 cells, and subjected to gel motility shift assay. Specific binding of the VDR and RXR heterodimers to VDRE1 was observed as supershifted bands by anti-VDR and -RXR αantibodies. The presence of the functional VDRE was assessed by transient transfection studies. Promoter-luciferase constructs with (PGL3-1781) and without (PGL3-1035) VDRE1 were transfected into SaOS2 cells. The treatment increased RANKL promoter activity to 160% in PGL3-1781, which was almost nullified in PGL3-1035. Introduction of mutation to the VDRE1 site of the PGL3-1781 construct also nullified the inductive effect of 1α, 25 (OH)_2 D_3 on the RANKL promoter. These data indicate that the human RANKL gene promoter shares striking structural similarities with the mouse promoter, and that 1α, 25 (OH)_2D_3 transactivates human RANKL gene through cis-acting VDRE located at -1584/-1570.
キーワード
破骨細胞
RANK ligand
プロモーター
クローニング
VDRE
カテゴリ
紀要論文
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資源タイプ
departmental bulletin paper
言語
Japanese (日本語)
ISSN
0075-6431
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NCID
AN00085973
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関連情報
NAID
110004653156
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