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https://hdl.handle.net/20.500.14094/00422385
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00422385 (fulltext)
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1.06 MB
3
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メタデータID
00422385
アクセス権
open access
出版タイプ
Version of Record
タイトル
胚性幹細胞から成長ホルモン産生細胞への分化
その他のタイトル
Differentiation to growth hormone-producing cells from embryonic stem cells
著者
著者名
工藤, 工
Kudo, Takumi
クドウ, タクミ
収録物名
神戸大学医学部紀要
Medical journal of Kobe University
巻(号)
65(1/2/3/4)
ページ
25-34
出版者
神戸大学医学会
刊行日
2005-03
公開日
2008-10-10
注記
本文ファイルは、国立情報学研究所CiNiiより提供されたものです。
抄録
胚性幹細胞(ES)細胞は分化の全能性を有する細胞として知られており,各種細胞への分化が報告されている。今回,下垂体細胞,特に成長ホルモン(GH)分泌細胞への分化が誘導されるかをRT-PCRを用いて検討した。ES細胞においてPtx1,Ptx2など下垂体分化の初期から認められる転写因子の発現が確認されたが,GH遺伝子の組織特異的発現を直接調節するPit1遺伝子の強制発現のみでは,内因性GHmRNAの発現は認あられなかった。GHmRNAの発現は胚様体(EB)形成の有無では影響されず,フィーダーフリーの培養により経時的に増加することを確認した。さらに,通常マウスES細胞は,leukemia inhibitory factor (LIF)存在下でその多能性が維持され,LIFがない状態では分化するとされているが,LIF存在下でGHmRNAの発現は増強された。しかし,そのGHmRNAの発現は弱くES細胞は不均等一に分化したものであるため,全ES細胞を用いて性質を検討することが困難であった。そこで,GHプロモーター/エンハンサーの下流にGFPを連結したベクターを製作しES細胞に導入しGH産生細胞の選択を行った。FACSを使用した解析では,RT-PCRの結果と同様にLIF存在下でGFP陽性細胞の割合が高く認められ,GFP陽性細胞と陰性細胞に分離したところ,陽性細胞でGHmRNAの増加を確認した。今回われわれは,LIFの存在下で経時的にGH産生細胞が増加すること,下垂体特異的なGHプロモーター/エンハンサーを利用することにより,GHmRNA産生細胞を分離することが可能であることを示した。
Embryonic stem (ES) cells are known as a cell that has a potency of differentiation to various types of cells. In this study we examined using RT-PCR whether ES cells can differentiate to pituitary cells, especially to growth hormone (GH)-producing cells. GH mRNA was not increased by the expression of Pit-1 that is a specific transcription factor for the GH gene expression in the pituitary, although mRNAs of transcription factors in the early stages of pituitary development, such as Ptx1 and Ptx2, were present in ES cells. The amount of GH mRNA was not influenced by embryoid body (EB) formation, but gradually incrased in the course of the culture on gelatin-coated dishes. Furthermore, the increase in GH mRNA was enhanced by leukemia inhibitory factor (LIF), which in general arrests ES cell differentiation and maintains full potency for differentiation. However the incrased expression of GH mRNA by LIF was not so much and not all the ES cells were able to differentiate to GH-producing cells, which made if difficult to characterize GH-producing cells. To circumvent this problem, reporter-gene expressing green fluorescence protein (GFP) under the control of GH promotar and locus control region, which is important for somatotrope-specific expression of GH gene, was constructed. The reporter gene was introduced into the genome of ES cells and GFP-positive cells were sorted from all the ES cells by FACS. In accordance with our data using RT-PCR for the determination of GH mRNA, LIF increased the numbers of GFP-positive cells. The content of both mRNA and protein of GH were higher in GFP-positive cells that in GFP-negative cells. These findings show that the cell sorting system using somatotrope-specific reporter gene is a good tool to separate GH-producing cells from ES cells and that LIF may enhance the differentiation of ES cells to GH-producing cells.
キーワード
成長ホルモン
胚性幹細胞
LIF
GHプロモーター
下垂体分化
カテゴリ
紀要論文
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資源タイプ
departmental bulletin paper
言語
Japanese (日本語)
ISSN
0075-6431
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NCID
AN00085973
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関連情報
NAID
110006483200
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